小鼠雌三醇  E3ELISA試劑盒酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
使用說明書elisa法測定
規(guī)格：48T/96T
本試劑盒僅供體外研究使用!
ELISA法定量測定人尿液或其它相關(guān)生物液體中小鼠雌三醇  E3ELISA試劑盒的含量。

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操作步驟 實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的小鼠雌三醇  E3ELISA試劑盒檢測范圍。 

. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品00μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)20分鐘。 

為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。 

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加標(biāo)記抗體工作液 00μl（取μl標(biāo)記抗體加99μl標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制），37℃,60分鐘。 

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡-2分鐘，200μl/每孔，甩干。  

4. 每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同標(biāo)記抗體工作液） 00μl，37℃，60分鐘。 

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡-2分鐘，200μl/每孔，甩干。 

6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔顯色不明顯，即可終止）。 

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。 

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后5分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測。