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修飾性工具酶

更新時間:2016-02-19 點擊量:927

修飾性工具酶

(一)末端轉移酶(terminal transferase)

l 末端轉移酶是一類不依賴于DNA模板的DNA聚合酶。ELISA試劑盒

l 特性:該類酶可以在沒有模板鏈存在的情況下,將核苷酸連接到dsDNA或ssDNA的在3’-OH。特別是對于平末端的雙鏈DNA末端加尾十分有用。

l zui常見的用途:給外源DNA片段及載體分子加上互補的同聚物尾巴,以創造黏性末端,便于重組。

(二) SI核酸酶(SI nuclease)

這是一種從米曲霉(Aspergillus oryzae)中分離的高度單鏈特異的外切酶。

活性:可以降解單鏈DNA或RNA或雙鏈的單鏈區。

其主要用途有:

⑴ 在cDNA合成過程中,切開cDNA的發夾末端;

⑵ 載體構建過程中,切去DNA片段的單鏈尾巴,ELISA試劑盒

形成平末端結構。

(三)堿性磷酸酶

從大腸桿菌中分離的細菌堿性磷酸酶(Bacterial Alkaline Phosphatase)簡稱BAP。

從小牛腸中分離的叫小牛腸堿性磷酸酶( Calf Intestinal Alkaline Phosphatase) ,簡稱CIP,用的廣泛。

酶催功能:

脫磷酸作用,將單鏈或雙鏈DNA或RNA5’-P轉化成5’-OH。

其主要用途有:

⑴在用32P標記DNA 5′端之前,去除5′端的磷;ELISA試劑盒

⑵在DNA重組技術中,去除DNA片段的5′磷酸,防止載體的自身環化,提高重組子比例。

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