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使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應(yīng)合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應(yīng),然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。?產(chǎn)品名稱:肺炎衣原體(CP)核酸檢測(cè)試劑盒價(jià)格
規(guī)格:48T/盒
類別:熒光-PCR法
運(yùn)輸:低溫、避光、快遞免費(fèi)送貨上門。
用途:生化實(shí)驗(yàn),合成實(shí)驗(yàn)等試驗(yàn)。
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個(gè)月。
自備試劑:樣品 RNA。
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性能指標(biāo):點(diǎn)擊了解更多熒光-PCR法。
.試劑盒檢測(cè)特異性為00%
2. 檢測(cè)試劑盒重現(xiàn)性為00%
3. 靈敏度可達(dá)到03/ml
4. 有效期為6個(gè)月
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 5-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至0kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.~umol或0~00pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。?3-羥基--基四氫吡咯 2 ug PT2-Puro 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
(S)-(+)-2-苯基酯 2 ug PT2/RMCE-puDTK 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
Fmoc-N-三苯基-L-天冬胺 2 ug PT2-Venus 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
氯甲環(huán)己酯 2 ug PT/neo 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
二苯并呋喃 2 ug pSY 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
芴甲氧羰酰基高丙氨 2 ug pT7TS 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
PYBROP(三吡咯烷基溴化鏻六氟磷鹽,) 2 ug pTALEN_v2 (HD) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2-溴-3-氟甲 2 ug pTALEN_v2 (NG) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
二甲苯 2 ug pTALEN_v2 (NI) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
4-溴-3-氟苯甲 2 ug pTALEN_v2 (NN) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
4-溴-3-氟苯 2 ug pTALETF_v2 (HD) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
乙基丙二二乙酯 2 ug pTALETF_v2 (NG) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
3-吲哚丁 2 ug pTALETF_v2 (NI) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
DL-酒石 2 ug pTALETF_v2 (NN) 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
三氧化 2 ug pTAL-Luc 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
肺炎衣原體(CP)核酸檢測(cè)試劑盒價(jià)格LTB(heat-labile enterotoxin B subunit) 人不耐熱腸毒素B亞單位 CAS: 規(guī)格: 50mg
CT(Chlamydia trachomatis) 人沙眼衣原體抗體 CAS: 5883-20-2 規(guī)格: 50mg
ANG 大鼠血管生長(zhǎng)素 CAS: 5352-2-9 規(guī)格: 50mg
schistosoma 人血吸蟲(chóng) CAS: 45707-73-7 規(guī)格: 25mg
sEPCR 大鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體 CAS: 33396-08-2 規(guī)格: 200mg
RV Ag(Rotavirus antigen) 人輪狀病毒抗原 CAS: 25-40-6 規(guī)格: 200mg
KAF/AR 大鼠角化細(xì)胞內(nèi)分泌因子/雙調(diào)蛋白 CAS: 77-26-9 規(guī)格: 200mg
cAMP 大鼠 CAS: 94-25-7 規(guī)格: 200mg
LP Ag(Legionella pneumophila antigen) 人軍團(tuán)菌抗原 CAS: 7-36-3 規(guī)格: .2ml×3ampules
ALCAM 大鼠白細(xì)胞活化黏附因子 CAS: 78-92-2 規(guī)格: .2ml×3ampules
colicin 人大腸菌素 CAS: 58786-99-5 規(guī)格: 500mg
IL-9 大鼠白介素9 CAS: 23-86-4 規(guī)格: .2ml×3ampules
ADV-Ag(Adenovirus Antigen) 人腺病毒抗原 CAS: 28-37-0 規(guī)格: 500mg
MIF 大鼠巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子 CAS: 88-32-4 規(guī)格: 200mg
Trichinella antibody 人旋毛蟲(chóng)抗體 CAS: 2-00-6 規(guī)格: 200mg
企業(yè)信息
ENTERPRISE INFORMATION上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
3004918891發(fā)送信件產(chǎn)品分類
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