羊抗大鼠IgG-FITC抗體*,羊抗大鼠IgG-FITC抗體用于免疫組化實(shí)驗(yàn)，WB實(shí)驗(yàn)，相應(yīng)的標(biāo)記抗體有HRP標(biāo)記抗體，F(xiàn)ITC標(biāo)記，BIO等。

【貯存條件】： 貯存于-20℃. 本品應(yīng)在低溫下保存，長(zhǎng)時(shí)間在暴露在空氣中，含量會(huì)有所降低。

規(guī)格：0.5ml/ml

材料和方法

　　. 材料 人成骨肉瘤MG63細(xì)胞為本實(shí)驗(yàn)室保存。重組質(zhì)粒MycSSHL(WT)、MycSSHL(S937A S978A/2SA)以及recombinant cofilinHis6由王巖教授惠贈(zèng)。脂質(zhì)體 2000( Invitrogen公司)。高糖DMEM培養(yǎng)基(美國(guó)Gibco 公司)，胎牛血清(Hyclone公司)，和EDTA(Sigma 公司)。A2387，KN93，CaM，重組Ca2+/CaMK Ⅱ(Rat Brain，Calbiochem)。抗體：Myc (9E0;Roche)，HA (3F0;Roche)，Pcofilin，Cofilin(Santa Cruz)， CaMKⅡδδ4 (Trans Genic Inc.)，PCaMKⅡα/β(Thr286/287;Upstate)。免疫共沉淀(Protein Gagarose)試劑盒(邁晨科技有限公司)。

　　.2 蛋白印跡實(shí)驗(yàn) MG63細(xì)胞鋪于35 mmol/L培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞密度達(dá)到60%～70%時(shí)，轉(zhuǎn)染MycSSHL，48 h后換無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)3 h，分別加入濃度為0.5，，2.5，5 μmol/L的A2387孵育0 min后裂解細(xì)胞，離心取上清加入凝膠加樣緩沖液,沸水浴上加熱5 min，上樣、電泳、轉(zhuǎn)膜、雜交〔一抗分別為Pcofilin、Cofilin、PCaMK Ⅱ δ及CaMK Ⅱ δ(4)〕、ECL顯色。

　　.3 體外激酶測(cè)定 MycSSHL(WT)及其突變體MycSSHL(2 SA)分別轉(zhuǎn)染至MG63細(xì)胞，48 h后采用免疫共沉淀(Protein Gagarose)試劑盒的方法及抗cmyc抗體，對(duì)照組為抗IgG抗體。回收MycSSHL，加入0.6 μg/ml重組活性CaMKⅡ(單獨(dú)或同時(shí)加入抑制劑KN93)以及00 μmol/L ATP、5 μCi〔γ32P〕ATP 于 20 μl 激酶反應(yīng)緩沖液中，30℃反應(yīng)40 min。反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行SDSPAGE電泳、轉(zhuǎn)膜，應(yīng)用放射自顯影技術(shù)檢測(cè)32P 標(biāo)記的SSHL水平。

　　.4 體外SSHL磷酸酶活性測(cè)定實(shí)驗(yàn) MycSSHL(WT)或MycSSHL (2 SA)轉(zhuǎn)染至MG63細(xì)胞，48 h后，采用免疫共沉淀(Protein Gagarose)試劑盒的方法及抗cmyc抗體，對(duì)照組為抗IgG抗體。回收MycSSHL，加入0.6 μg/ml CaMKⅡ(單獨(dú)或同時(shí)加入抑制劑KN93)，20 μg/ml CaM，以及 6.3 μg/ml cofilinHis6 于 20 μl 反應(yīng)緩沖液(50 mol/L HEPES，pH 7.4，0. mol/L CaCl2，0.5 mol/L EDTA，3 mol/L MgCl2，00 mmol/L NaCl， mol/L dithiothreitol，0.5 mg/ml BSA， μg/ml leupeptin),中30℃反應(yīng)2 h。反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行SDSPAGE電泳、轉(zhuǎn)膜、雜交(一抗分別為Pcofilin，Cofilin， cmyc 抗體)、ECL顯色。

本公司更多產(chǎn)品優(yōu)惠:

大鼠骨形成蛋白BMPs抗體    235    鼠抗人乳腺癌相關(guān)抗原單克隆抗體    CA5-3 Antigen      脂肪細(xì)胞增強(qiáng)結(jié)合蛋白
大鼠骨粘連蛋白ON抗體    236    鼠抗人結(jié)腸癌相關(guān)抗原單克隆抗體    CA9-9 Antigen      α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗體
大鼠胱天蛋白酶3Casp-3抗體    237    鼠抗人腫瘤相關(guān)粘液抗原單克隆抗體    CA242      鼠抗人甲胎蛋白抗體
大鼠胱天蛋白酶9Casp-9抗體     238    鼠抗人CA72-4/TAG-72單克隆抗體    CA72-4/TAG-72      鼠抗人甲胎蛋白單克隆抗體（包被）
大鼠過敏毒素/補(bǔ)體片斷4aC4a抗體    239    兔抗人降鈣素多克隆抗體    Calcitonin(CT)        鼠抗人甲胎蛋白單克隆抗體(檢測(cè))
大鼠過敏毒素/補(bǔ)體片斷4aC4a抗體    240    鼠抗人鈣結(jié)合蛋白單克隆抗體    Caldesmon       晚期糖基化終末產(chǎn)物特異性受體抗體
大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體αPPAR-α抗體    24    鼠抗人Calponin單克隆抗體    Calponin        晚期糖基化終末產(chǎn)物抗體
大鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ PPAR-γ抗體    242    兔抗人Calretinin多克隆抗體    Calretinin        軟骨蛋白聚糖/可聚蛋白多糖抗體