緊密連接蛋白-5抗體樣本的物種 應(yīng)選擇物種相同或有交叉反應(yīng)的抗體，抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有交叉反應(yīng)，因其氨基酸序列同源性較高，如果樣本的種類未列入抗體說明書上的交叉反應(yīng)種屬表中，并不意味著該抗體不適用于檢測該物種的蛋白，而只是表示該物種尚未用此抗體檢測驗(yàn)證過，應(yīng)通過序列比對(duì)的方法來預(yù)測交叉反應(yīng)，可應(yīng)用Expasy 和 NCBI BLAST 來進(jìn)行不同物種蛋白同源性比對(duì)。
緊密連接蛋白-5抗體一抗宿主物種的選擇一般說來，在使用偶聯(lián)二抗結(jié)合無偶聯(lián)物的一抗時(shí)，一抗宿主動(dòng)物的物種選擇較為重要，對(duì)于免疫組化而言，盡可能選擇與樣本不同種系物種的一抗，從而避免二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白產(chǎn)生交叉反應(yīng)，例如：檢測小鼠樣本蛋白，則不應(yīng)選擇小鼠或大鼠源的一抗，選兔源的一抗，則二抗則可選擇偶聯(lián)了檢測分子（酶、熒光素、等）的抗兔IgG。
如果選擇有偶聯(lián)物的一抗則不適用上述情況，除免疫組化外的其它對(duì)不含內(nèi)源性免疫球蛋白樣本的檢測方法，則抗體宿主物種的影響不大，如對(duì)不含IgG 的細(xì)胞裂解物樣本的western blotting檢測，盡管如此，含有血清的組織裂解物和組織培養(yǎng)上清中含有免疫球蛋白，還原變性樣本中含IgG，在western blot 檢測中則結(jié)合出現(xiàn)IgG 分子50 and 25 kDa 的重鏈和輕鏈條帶。
二抗的選擇 二抗應(yīng)選用與使用的一抗相同的物種來源，例如：如果你的一抗是小鼠的單克隆抗體，二抗則選抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。建議檢查二抗說明書確保該抗體適用于你的檢測應(yīng)用， 二抗一般連接熒光素FITC 或發(fā)光團(tuán)。
上海谷研生物科技有限公司特殊抗體的保存條件：
. 酶聯(lián)抗體：永遠(yuǎn)保存在4 度，避免凍起來。否則會(huì)導(dǎo)致酶活性的下降或者喪失
2. 偶聯(lián)抗體：所有偶聯(lián)抗體都是在棕色管中或使用錫箔紙避光保存。尤其是熒光抗體，對(duì)
光極為敏感，因此在所有的實(shí)驗(yàn)階段也是要避光操作的！
3. IgG3 的同型對(duì)照：永遠(yuǎn)保存在4 度，避免凍起來。因?yàn)槿绻霈F(xiàn)凍融過程，該抗體非常
容易形成多聚體無論是保存還是運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融！
反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體變性，導(dǎo)致多聚體形成，從而降低抗體的結(jié)合能力！
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關(guān)于加入甘油保存：有些人會(huì)加50%的甘油到抗體中來避免反復(fù)凍融，甘油在-20 度 會(huì)降低冰點(diǎn)。這對(duì)很多抗體可能是可行的。但是abcam 僅對(duì)非常小的一部分抗體檢測過其在這種條件下的穩(wěn)定性；而abcam 只對(duì)按照條件保存的抗體提供質(zhì)量保證！加入甘油的溶液不建議在-80 度保存，因?yàn)檫@已經(jīng)超過了甘油的冰點(diǎn)。如果您要加入甘油來保存抗體的話，請(qǐng)謹(jǐn)慎注意無菌操作，避免污染！
關(guān)于蛋白保護(hù)劑：
蛋白在高濃度時(shí)更不容易降解（ mg/ml 或者更高），這就是為什么在抗體中加入BSA 之類作為穩(wěn)定劑的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標(biāo)記的話，則不能加入蛋白穩(wěn)定劑，因?yàn)檫@些穩(wěn)定劑會(huì)和抗體一起競爭結(jié)合標(biāo)記物。