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小鼠肺泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)方法

更新時(shí)間:2021-06-17 點(diǎn)擊量:2133

 小鼠肺泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)方法:

、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗-2次,加入mL 0.25%(T25瓶)
②-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

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A375/DDP人惡性黑色素瘤耐藥株
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T-24/DDP人膀胱移行細(xì)胞癌耐細(xì)胞株
A549/DDP人肺癌耐藥株
SGC790/DDP人胃癌耐藥株
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A549/TAXOL人肺癌耐藥株
MCF7/Taxol人乳腺癌耐藥株
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Huh-7/Sorafenib人肝癌索拉非尼耐藥株
A549/耐藥株人肺癌耐藥株
SGC790/V人胃癌長(zhǎng)春新堿耐藥
A2780/V人卵巢癌長(zhǎng)春新堿耐藥株
HCT8/V人結(jié)腸癌長(zhǎng)春新堿耐藥株
HL-60/Adr人白血病耐藥株
K562/Adr人白血病耐藥株
A2780/Adr人卵巢癌耐藥株

 

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