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南非諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒實驗方法步驟

更新時間:2021-02-02 點擊量:684

南非諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒實驗方法步驟:

方法

:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

0×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix (2mM)             

4 μl     引物(0pM)                 

2 μl     引物2(0pM)                 

2 μl     Taq酶 (2U/μl)               

μl     DNA模板(50ng-μg/μl)  

μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋,產品僅用于科研不加或添加石蠟油。

2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,在72℃ 保溫7min。

3:結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。

4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用00μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-0μl電泳檢測。

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