)訓(xùn)練目的

掌握Hank’s、O．0l mol／L PBS兩種常見細(xì)胞洗滌液的配制方法。

2)實驗原理

    Hank's、0．Ol mol／L PBS兩種是細(xì)胞培養(yǎng)中常用到的基礎(chǔ)液。常用于洗滌離心后的細(xì)胞沉淀以及培養(yǎng)基等用液的溶劑。Hank's和0．0mol／L PBS兩種BSS液因其不含對高溫高壓敏感的物質(zhì)，故可以采用濕熱滅菌法滅菌。

3)實驗材料

①器材：高壓蒸汽滅菌鍋、pH計、燒杯( 000 mL)、容量瓶( 000 mL)、瓶、濾紙、一次性0．22μm塑料微孔濾膜。

②試劑：CaCl2、MgSO4·7H20、葡萄糖、KH2PO4、Na2HPO4·H20、新鮮制備的三蒸水、74％NaHC03、KCl、Na2HP04。

4)操作步驟

()Hank's液的配制和無菌處理Hank's液的配方。

①準(zhǔn)確稱取O．49CaCl2溶解在裝有00 mL三蒸水的燒杯中。

②準(zhǔn)確稱取O．20 g MgSO4·7H2O溶解在含00 mL三蒸水的另一燒杯中。

③按配方(表5．)準(zhǔn)確稱取其他試劑依次溶解在盛有650 mL三蒸水的燒杯中，注意應(yīng)待前一種試劑*溶解后，再溶解下一種成分，混勻。細(xì)胞

④將①、②液緩慢倒人③中，并不時攪動，防止出現(xiàn)沉淀。

⑤將0．35 g NaHC03溶解在37℃00 mL三蒸水中。

⑥用數(shù)滴NaHC03液溶解O．02 g酚紅。

⑦將⑤、⑥液逐滴并攪拌加入到④液中。

⑧將⑦液移人容量瓶中，補(bǔ)加三蒸水定容至 000 mL，然后充分混勻。

⑨用O．22μm微孔濾膜過濾除菌后分裝，4℃冰箱內(nèi)保存；或者先分裝后，再用8磅0 min高壓蒸汽滅菌，貼上標(biāo)簽后于4℃冰箱內(nèi)保存。

(2)O．0 mol/L PBS的配制

①準(zhǔn)確稱取NaCl 8．O g、KCl 0.2 g、Na2HPO4.5 g(如為Na2HPO4·2H20，則為2．89 g)、KH2P04 0．2 g。

②將上述試劑依次溶于 000 mL去離子水中，*溶解后，5℃高壓滅菌0～5 min，4℃冰箱儲存?zhèn)溆谩?strong>細(xì)胞