細胞增殖是生物體的重要生命特征，細胞以分裂的方式進行增殖。單細胞生物，以細胞分裂的方式產(chǎn)生新的個體。多細胞生物，以細胞分裂的方式產(chǎn)生新的細胞，用來補充體內(nèi)衰老或死亡的細胞；同時，多細胞生物可以由一個受精卵，經(jīng)過細胞的分裂和分化，zui終發(fā)育成一個新的多細胞個體。必須強調(diào)指出，通過細胞分裂，可以將復制的遺傳物質(zhì)，平均地分配到兩個子細胞中去。可見，細胞增殖是生物體生長、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎(chǔ)。

一、MTT

    又稱MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經(jīng)濟。

二、CCK-8

    Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

    CCK-8的原理跟MTT其實是相同的，不同之處在于CCK-8法生成的formazan是水溶性的，不需要再吸出培養(yǎng)液加入有機溶劑溶解這個步驟，因此可以減少一定的誤差。其他優(yōu)點就是重復性優(yōu)于MTT；對細胞毒性小；為瓶溶液，不需預制，即開即用。

三、BrdU

    Brdu，即5-Bromo-2'-Deoxyuridine,中文全名5-溴脫氧核苷，為胸腺嘧啶的衍生物，可代替胸腺嘧啶在DNA合成期（S期），活體注射或細胞培養(yǎng)加入，而后利用抗Brdu單克隆抗體，ICC染色，顯示增殖細胞。同時結(jié)合其它細胞標記物，雙重染色，可判斷增殖細胞的種類，增殖速度，對研究細胞動力學有重要意義。

    但由于抗體分子量大，難于摻入并被有效檢測，因此BrdU檢測需采用DNA酶或HCl或加熱使DNA變性；這些處理方法會破壞抗原識別位點，此外許多細胞周期分析的染料都需要dsDNA，這種處理方法也使得同一樣本無法同時進行細胞周期分析。對于植物細胞等有細胞壁的分析，采用抗體檢測還需要消化細胞壁，細胞壁消化酶常含有一些雜質(zhì)，會導致檢測的可靠性降低，同時BrdU檢測則需要進行長時間的孵育--幾個小時甚至過夜。

四、EdU

    EdU（5-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細胞增殖時期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復制的DNA分子中，通過基于EdU與Apollo?熒光染料的特異性反應快速檢測細胞DNA復制活性，適用于細胞增殖、細胞分化、生長與發(fā)育、DNA修復、病毒復制、細胞標記示蹤等方面的研究，尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實驗。

    與BrdU檢測方法相比，EdU檢測方法更快速、更靈敏、更準確。EdU染料只有BrdU抗體的/500，在細胞內(nèi)很容易擴散，無需DNA變性（酸解、熱解、酶解等），可有效避免樣品損傷，而且無需抗原抗體反應，能在細胞和組織水平更準確地反映DNA復制活性。