豬Ⅲ型膠原(COL3)elisa檢測(cè)試劑盒使用方法：

1.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.棄去液體，甩干，每個(gè)孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制)，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育1小時(shí)。

3.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時(shí)。

5.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。

6.每孔加底物溶液100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯況酌情縮短或延長(zhǎng)，但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí)，即可終止)。

7.每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。

8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測(cè)程序。

9.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。

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